> Методы > Двугибридная система > Экспресс метод выделения pDNA из дрожжей.
Экспресс метод выделения pDNA из дрожжей.
Главная.
Новости.
О проекте.
Справочник.
Рестриктазы.
Методы.
Растворы.
Расчёты.
Обзоры.
Обучение.
Ссылки.
Скачать сайт.
Образовательные
ресурсы.
Быстрый метод выделения плазмидной ДНК из дрожжей, для последующей электропорации E.coli.
- Посеять одиночную колонию в 5ml селективной среды и растить не менее 20h при +30°С;
- 1.5ml ночной культуры поместить в 1.7ml пробирку, ЦФ 1', удалить супер;
- Повторить п.2 еще 2 раза;
- Суспендировать осадок в 200µl лизирующего буфера;
- Добавить 0.3g стеклянных шариков и 200µl Ф:X:I;
- Вортекс 2';
- ЦФ 5', водную фазу перенести в новую пробирку и осадить этанолом (добавить 1/10V NaOAc pH5.2 и 2.5V EtOH);
- Осадок сполоснуть 70% EtOH, подсушить, растворить в 20µl 1xTE.
