Выделение pDNA (максипреп - лизис щелочью) | Практическая молекулярная биология

растить ночную культуру 20-24 часа в 100-500ml богатой среды: 37^oС, 200-300rpm;
ЦФ 4^oС, 10-15', слить среду;
ЦФ 4krpm, 1', отсосать остатки жидкости;
ресуспензировать в 10(5)ml раствора "I";
+ 1(0.5)ml свежеприготовленного раствора лизоцима (10mg/ml в р-ре "I");
NT, 15';
+ 20(10)ml раствора "II", вылить резко, смешать:

0^oС, 5';
+ 10(5)ml холодного 10М AcONH₄ (добавлять 5 ml пипеткой по каплям), смешать;
0^oС, 5';
ЦФ 5krpm, 4^oС, 10';
супер снять, разделить на 2 пробирки, добавить к каждой по 12.5 ml изопропанола. Делать это на весах, чтобы пробирки имели равный вес;
NT, 10';
ЦФ 5krpm, 4^oС, 10', сбросить супер;
ЦФ NT, 3', отсосать остатки жидкости (не подсушивать);
cуспендировать осадок в 800µl 2 M AcONH₄, объединить в одной 2ml пробирке;
NT, 5';
ЦФ NT, 10';
cупер перенести в пробирку с 800µl изопропанола;
NT, 5';
ЦФ NT, 5';
сполоснуть 70% EtOH;
растворить в 0.2-1ml H₂0.

Комментарии.