Перенос по Southern (щелочной) | Практическая молекулярная биология

зарисовать маркер;
отрезать 1/2 маркера, лишний гель, лунки, правый верхний угол геля;
измерить и записать размер геля;
качать в 0.25M HCl (+ 10' после того, как пожелтеет бромфеноловый синий);
сполоснуть H₂O;
мягко качать в 0.4N NaOH ~30';
в это время подготовить:

* 3 куска ватмана 3MM по размеру геля;
* 2 больших куска ватмана 3MM - на подложку;
* мембрану Hybond N⁺ (размер геля + 3-5mm c каждой стороны);
* 4 ленты парафильма;
* стопку фильтровалки;

поочередно обмакнуть в 0.4M NaOH большие куски ватмана и положить их на подложку без пузырей, опустить концы в NaOH;
положить гель дном вверх (без пузырей), налить сверху немного 0.4M NaOH;
подложить рядом ленты парафильма так, чтобы мембрана не соприкоснулась с 3MM когда гель сожмется;
мембрану смочить в 0.4M NaOH, положить на гель (без пузырей);
сверху - 3 куска ватмана 3MM (нижний перед укладкой смочить в 0.4N NaOH), стопку фильтровалки, плоскую пластину и грузик (~300g для 10x10cm²геля);
перенос в 0.4M NaOH 2-16h;
зарисовать на мембране карандашом границы геля;
подписать мембрану;
прополоскать ~5' в 2хSSC;
срезать ненужные участки;
завернуть в Saran Wrap, хранить при NT или при -20^oС.

> Методы > Электрофорез > Саузерн (щелочной перенос). Перенос по Southern (щелочной).		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
Растворы. HCl 0.25M Комментарии. Общие. По пунктам.	Щелочной перенос применяется для положительно заряженных нейлоновых мембран (таких как HybondN⁺). Фиксация DNA на мембране происходит одновременно с переносом. Для нейтральных или отрицательно заряженных мембран перенос проводится в буфере с высокой ионной силой (Перенос по Southern (в буфере с высокой ионной силой).). Фиксация проводится после переноса.
зарисовать маркер; отрезать 1/2 маркера, лишний гель, лунки, правый верхний угол геля; измерить и записать размер геля; качать в 0.25M HCl (+ 10' после того, как пожелтеет бромфеноловый синий); сполоснуть H₂O; мягко качать в 0.4N NaOH ~30'; в это время подготовить: * 3 куска ватмана 3MM по размеру геля; * 2 больших куска ватмана 3MM - на подложку; * мембрану Hybond N⁺ (размер геля + 3-5mm c каждой стороны); * 4 ленты парафильма; * стопку фильтровалки; поочередно обмакнуть в 0.4M NaOH большие куски ватмана и положить их на подложку без пузырей, опустить концы в NaOH; положить гель дном вверх (без пузырей), налить сверху немного 0.4M NaOH; подложить рядом ленты парафильма так, чтобы мембрана не соприкоснулась с 3MM когда гель сожмется; мембрану смочить в 0.4M NaOH, положить на гель (без пузырей); сверху - 3 куска ватмана 3MM (нижний перед укладкой смочить в 0.4N NaOH), стопку фильтровалки, плоскую пластину и грузик (~300g для 10x10cm²геля); перенос в 0.4M NaOH 2-16h; зарисовать на мембране карандашом границы геля; подписать мембрану; прополоскать ~5' в 2хSSC; срезать ненужные участки; завернуть в Saran Wrap, хранить при NT или при -20^oС.