Выделение ДНК из агарозного геля с помощью диализного мешка

Выделение ДНК из агарозного геля.

вырезать полосу из геля под длинноволновым UV (360 nm);
поместить в диализный мешок, расположить его перпендикулярно электрическому полю;
"выгнать" DNA из геля на стенку мешка, переключить ток на 15'' в обратную сторону;
извлечь из диализного мешка буфер;
довести NaCl до 0.1M;
экстрагировать Ф, Ф:Х, Х;
добавить

1/4V 10M AcONH₄,
2V EtOH, осадить;

сполоснуть 70% EtOH;
растворить в воде или TE.

Приготовление диализных трубок.

для большинства задач можно использовать мембрану прямо из рулона после смачивания и ополаскивания водой. При необходимости, глицерол-, серо-содержащие компоненты и тяжелые металлы могут быть убраны следующим образом:

отрезать трубку необходимой длинны;
смочить и кипятить 2-5' (либо вымачивать без кипячения по 30') в большом избытке10mМ бикарбоната натрия;
2х кипятить 2-5' (либо вымачивать без кипячения по 30') в большом избытке 10mМ EDTA;
несколько раз сполоснуть H₂O;
хранить в 20-50% EtOH, +4^oC.

> Методы > Выделение ДНК из агарозного геля > С помощью диализного мешка. Выделение ДНК из агарозного геля с помощью диализного мешка.		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
Выделение ДНК из агарозного геля. Приготовление диализных трубок. Комментарии. По пунктам.	метод позволяет выделять фрагменты DNA любой длины.
Выделение ДНК из агарозного геля. вырезать полосу из геля под длинноволновым UV (360 nm); поместить в диализный мешок, расположить его перпендикулярно электрическому полю; "выгнать" DNA из геля на стенку мешка, переключить ток на 15'' в обратную сторону; извлечь из диализного мешка буфер; довести NaCl до 0.1M; экстрагировать Ф, Ф:Х, Х; добавить 1/4V 10M AcONH₄, 2V EtOH, осадить; сполоснуть 70% EtOH; растворить в воде или TE. Приготовление диализных трубок. для большинства задач можно использовать мембрану прямо из рулона после смачивания и ополаскивания водой. При необходимости, глицерол-, серо-содержащие компоненты и тяжелые металлы могут быть убраны следующим образом: отрезать трубку необходимой длинны; смочить и кипятить 2-5' (либо вымачивать без кипячения по 30') в большом избытке10mМ бикарбоната натрия; 2х кипятить 2-5' (либо вымачивать без кипячения по 30') в большом избытке 10mМ EDTA; несколько раз сполоснуть H₂O; хранить в 20-50% EtOH, +4^oC.