> Методы > Экспрессия белков > Pfu полимераза.
Очистка Pfu полимеразы (клон pETpfu в BL21(DE3)pLysS).
Главная.
Новости.
О проекте.
Справочник.
Рестриктазы.
Методы.
Растворы.
Расчёты.
Обзоры.
Обучение.
Ссылки.
Скачать сайт.
Образовательные
ресурсы.
- Экспрессирующая конструкция описана в "Protein expression and purification, 11, 179-84 (1997) Expression in Escherichia coli of the Thermostable DNA Polymerase from Pyrococcus furisous. C. Lu and H.P. Erickson".
- Индукция и очистка проводятся точно так же, как при очистке Taq pol "Очистка Taq полимеразы (клон pTp4).". Отличия:
- вместо Amp используется смесь Carbenicillin 200 µg/ml + Chloramphenicol 34 µg/ml;
- возможное время индукции 4h-ON;
- приятным отличием в случае Pfu pol. является то, что преципитат при тепловой обработке п.36 получается кашеобразным: бактериальная DNA в супернатант не переходит как бы вы не обращались с раствором в пп.34-36;
- на 30ml колонку можно наносить осветлённый лизат, содержащий ~15ku (0.5ku на 1ml колонки);
- В наших руках получался выход ~30,000u на литр культуры (но, возможно, что различие со статьёй в 2.7 раз связано с использованием Taq-полимеразного буфера для оценки активности "Определение активности полимеразы.").
Комментарии.
Общие.
