Фиксация и заливка в парафин (дрозофила) | Практическая молекулярная биология

Фиксация в Корнуа.

на предметном стекле с помощью скальпеля отрезать у мух голову и грудь;
фиксировать в "Корнуа" 2h;
отмывать в 80% EtOH ON;
фиксированные объекты можно хранить в течение 1-2 месяцев при -20^oС в 80% EtOH;

Проводка по спиртам и заключение в парафин.

в день заливки в парафин с утра поставить прогреваться все парафины и "кашу" в термостате (56^oС);
провести:

EtOH (80%), NT => 30'
EtOH (96%), NT => 30'
EtOH (100%) (I), NT => 30'
EtOH (100%) (II), NT => 30'
EtOH (100%):ксилол (1:1), NT => 15'
ксилол (I), NT => 20'
ксилол (II), NT => 20'
ксилол:парафин (1:1), 56^oC => 40'
парафин (I), 56^oC => 40'
парафин (II), 56^oC => 40';

Заливка в парафин.

прогреть (в течение 20-30') часовое стекло и подложку бинокуляра в термостате (56^oС);
перед заливкой парафина смазать часовое стекло глицерином;
"заливочный" (чистый) парафин => в часовое стекло;
разогретой пипеткой перенести мух в "заливочный" парафин;
ориентировать объект под бинокуляром с помощью препаровальной иглы, нагретой на спиртовке;
опустить стекло в холодную воду, подержав его на поверхности 30-40'';
вырезать при помощи разогретого скальпеля "минимальные" блоки с объектом, наклеить на кубики.

> Методы > Иммуногистохимия и in situ > Приготовление срезов тканей. Фиксация и заливка в парафин (дрозофила).		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
Фиксация в Корнуа. Проводка по спиртам и заключение в парафин. Заливка в парафин. Растворы. Фиксатор Корнуа Приготовление 100% EtOH. Комментарии. По пунктам.
Фиксация в Корнуа. на предметном стекле с помощью скальпеля отрезать у мух голову и грудь; фиксировать в "Корнуа" 2h; отмывать в 80% EtOH ON; фиксированные объекты можно хранить в течение 1-2 месяцев при -20^oС в 80% EtOH; Проводка по спиртам и заключение в парафин. в день заливки в парафин с утра поставить прогреваться все парафины и "кашу" в термостате (56^oС); провести: EtOH (80%), NT => 30' EtOH (96%), NT => 30' EtOH (100%) (I), NT => 30' EtOH (100%) (II), NT => 30' EtOH (100%):ксилол (1:1), NT => 15' ксилол (I), NT => 20' ксилол (II), NT => 20' ксилол:парафин (1:1), 56^oC => 40' парафин (I), 56^oC => 40' парафин (II), 56^oC => 40'; Заливка в парафин. прогреть (в течение 20-30') часовое стекло и подложку бинокуляра в термостате (56^oС); перед заливкой парафина смазать часовое стекло глицерином; "заливочный" (чистый) парафин => в часовое стекло; разогретой пипеткой перенести мух в "заливочный" парафин; ориентировать объект под бинокуляром с помощью препаровальной иглы, нагретой на спиртовке; опустить стекло в холодную воду, подержав его на поверхности 30-40''; вырезать при помощи разогретого скальпеля "минимальные" блоки с объектом, наклеить на кубики.