Мечение total RNA с oligo(dT) праймера | Практическая молекулярная биология

oligo(dT) primer ( 100µM) - 0.5µl
total RNA - 10µg
H₂O - до 15µl;

5x FSB (first strand buffer) - 8µl
0.1M DTT - 4µl
A^-mix, 20x - 1µl
RNase Block - 0.5µl
a[³³P]dATP (10µCi/µl) - 10µl

> Методы > Экспрессионный анализ > Меченье тотальной РНК. Мечение total RNA с oligo(dT) праймера.		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
	Состав растворов, очистка от РНК и гибридизация - как описано в протоколе "Random primer на polyA⁺RNA".
в пробирку: oligo(dT) primer ( 100µM) - 0.5µl total RNA - 10µg H₂O - до 15µl; 70^oC, 3'; 0^oC, 2'; добавить: 5x FSB (first strand buffer) - 8µl 0.1M DTT - 4µl A^-mix, 20x - 1µl RNase Block - 0.5µl a[³³P]dATP (10µCi/µl) - 10µl NT, 1' ( за это время премешать реакцию, сбросить на центрифуге); добавить SuperScript RT (200u/µl) /BRL/ - 2µl; 42^oC, 1h; 0^oC, определить процент включения по преципитации 10% ТХУ.