Введение.

• Априори, объем, выставленный на пипетке, равен объему жидкости в типе, только в том случае, если эта жидкость - вода при комнатной температуре. "Особое внимание" (контролировать объем в типе визуально) требуется обращать при отборе:
1. вязких жидкостей типа глицерина (практически всегда в таких случаях лучше пользоваться весами);
2. жидкостей с низким поверхностным натяжением, особенно при повторных заборах (детергенты, растворы белков);
холодных и горячих растворов, так как воздух в типе меняет температуру, и, следовательно, объём (растворы ферментов на -20^oС, горячие буфера для гибридизации, верхний агар).
• Автоматические пипетки используют либо совсем неградуированные, либо слабо градуированные типы. С заметной частотой случается, что отбирается неправильный объём (некачественный тип, тип неплотно одет, тип не сразу коснулся жидкости, тип закупорился каким-нибудь сгустком). Поэтому нужно контролировать работу пипетки "на глаз". Речь не идёт о том, чтобы различать 950µl и 990µl, но разницу в 25-30% нужно уметь заметить (не говоря уже о том, что случается, что начинающие путают 200µl и 20µl пипетки).

• Типчик имеет не только внутренний объем, но и поверхность:
1. не надо глубоко погружать тип в отбираемую жидкость (особенно в случае вязких жидкостей);
2. следует обращать внимание, чтобы тип не касался ничего лишнего своей внешней поверхностью.
• Априори, материал пипетки выдерживает только пары воды. В остальных случаях устойчивость не гарантируется. Особое внимание следует обращать на летучие жидкости. Лучше вообще не использовать автоматическую пипетку при работе с органическими растворителями и кислотами.

Правила работы.

1. перед отбором сбросить жидкость на дно эппендорфа (ЦФ). Боковыми стенками типа не касаться боковых стенок пробирки*;
2. отжать пипетку до первого упора;
3. жидкость отбирать прямо с поверхности, тип глубоко не опускать;
4. выдавливать жидкость, отжав пипетку до второго упора (по возможности на стенку пробирки или на поверхность жидкости – лучше не капать и не погружать тип глубоко).

Для того, чтобы жидкость не попала внутрь автоматической пипетки

1. отжимать поршень вверх обязательно плавно;
2. не класть на стол пипетку с надетым типчиком **;
3. не сбрасывать типчик, в котором есть жидкость.

____________________
* сразу по двум причинам: (i) часто тип укрепляют на пипетке руками, так что внешняя поверхность у него грязная; (ii) на внешнюю поверхность может налипнуть жидкость со стенок пробирки.
** тоже по двум причинам: (i) типчик может загрязниться/кого-нибудь испачкать (особое внимание при "чистой" работе (стерильные среды, RNA, PCR) или работе с "опасными" растворами (бактериальные суспензии, радиоактивность, бромистый этидий); если в типе осталась жидкость, то она может затечь внутрь пипетки (если осталось больше 50µl в желтом типе или больше 200µl в синем). НО!!! Растворы с низким поверхностным натяжением (растворы белков, детергентов, фенол, хлороформ, спирт) способны затечь в горизонтально лежащую пипетку даже если их в типчике очень мало.

Чистка пипетки.

Если в пипетку всё же попала жидкость, её нужно разобрать и почистить. В первый раз нужно попросить опытного сотрудника, чтобы он показал как это делается (и внимательно смотреть самому, чтобы научиться). Точность пипеток проверяется на электронных весах. В качестве жидкости используется mQ (или дистиллят).

1. разобрать пипетку*;
2. промыть её (но не наборный механизм) раствором детергента**;
3. сполоснуть mQ;
4. протереть фильтровалкой;
5. подсушить в термостате 37-42^oС, ~1-2h;
6. смазать хорошей вакуумной смазкой;
7. вновь собрать.

____________________
* очень внимательно отнеситесь к маленькому уплотнительному колечку и подложке для него (чтобы они не потерялись);
** если внутри грязь пристала плотно, то для чистки можно использовать толстую нитку с привязанным к ней кусочком марли.