Комментарии.
Общие.
- Для уменьшения временных затрат в двугибридном скрининге, полезно элиминировать повторяющиеся клоны еще на этапе дрожжевых колоний. Это удобно сделать с помощью ПЦР и последующей гибридизации.
- Cтеклянные шарики - Sigma #G-8772.
- b-glucuronidase from Helix pomatia (Type HP-2). Sigma, G-7017.
По пунктам.
п. 3.
- Этот пункт можно опустить, если одновременно анализируется много образцов. Улучшение незначительное, а трудоемкость возрастает существенно.
п. 5.
- Возможно, что для ПЦР понадобится достаточно большое количество циклов (35-40). Время элонгации можно поставить 1 минуту. Нормально получаются фрагменты от 500 до 2500bp.
|