Методы.

Смотри также:


• Unated States Patent and Trademark Office
• Web-версия Molecular Cloning
  
  Сайты, которые сами держат коллекции протоколов:
  
  
• Nucleic Acids Research methods
• Technical tips Online
• Molecular Biology Protocols


Коллекции ссылок на протоколы:


• Protocol Online-Your Lab's Reference Book
• LabVelocity
• BioMedNet
• The Internet Directory of Molecular Biology and Biotechnology

02. Двугибридная система.

02_01 Экспресс метод выделения pDNA из дрожжей.
02_02 Анализ активации репортерного гена LacZ.
02_03 Трансформация дрожжей плазмидной ДНК.
02_04 Выделение плазмидной ДНК из дрожжей на колонках.
02_05 Трансформация дрожжей кДНК библиотекой.
02_06 Проверка взаимодействия двух белков в двугибридной системе.
02_07 Поиск автоактиваторов в двугибридной системе.
02_08 Растворы, среды, антибиотики, добавки для двугибридной системы.
02_09 ПЦР дрожжевых колоний.


03. Работа с бактериями.

03_01 Номенклатура генотипа бактерий.
03_02 Бактериальные штаммы для мол. клонирования.
03_03 Хранение бактериальных штаммов.
03_04 Трансформация бактерий.
03_05 Электропорация.
03_06 Бактериальные штаммы для мол. клонирования (сводная таблица). только в MS Word 2000
03_07 Гибридизация бактериальных колоний с радиоактивным зондом.
*** Базовые правила работы с бактериями на странице "Стерильная работа".


04. Выделение pDNA.

04_01 Выделение pDNA (минипреп).
04_02 Выделение pDNA (максипреп).
04_03 Экспресс метод выделения pDNA.
04_04 Очистка pDNA равновесным центрифугированием в CsCl.

05. Получение одноцепочечной DNA.

05_01 Амплификация и хранение хелперных фагов.
05_02 Выделение одноцепочечной ДНК.


06. Работа с фагом .

06_01 Выделение ДНК фага .
06_02 Выделение ДНК фага для приготовления вектора.
06_03 Выщепление pSK(-) из ZAP in vivo.


07. Электрофорез.

07_01 Агарозный гель-электрофорез.
07_02 Заливка агарозного геля.
07_03 Щелочной агарозный гель.
07_04 Перенос по Southern (щелочной).
07_05 Перенос по Southern (в буфере с высокой ионной силой).
07_06 DNA Маркеры.


08. Выделение ДНК из агарозного геля с помощью...

08_01 PEG/TAE.
08_02 glass milk.
08_03 LMP-агарозы.
08_04 диализного мешка.
08_05 DEAE - мембраны.
08_06 Центрифугирования.


09. Клонирование.

09_01 Осаждение DNA (RNA) этанолом.
09_02 Другие методы осаждения DNA(RNA) - PEG, Zn, CTAB.
09_03 Мутагенез с помощью Gene Editor system.
09_06 Лигирование.
09_07 Свойства DNA полимераз.


10. Несистематизированные методики.

10_01 Спектрофотометрическое измерение концентрации DNA(RNA).
10_02 Реакция Random primer.
10_03 Определение процента включения.
10_04 Изготовление G-50 spin-колонок.


11. Олигонуклеотиды.

11_01 Олигонуклеотиды.
11_02 Отжиг адаптеров.
11_04 Форез олигонуклеотидов.


12. PCR.

12_01 Состав PCR реакции.
12_02 Параметры PCR реакции.
12_03 Влияние различных веществ на PCR.
12_04 Борьба с загрязнениями при PCR.
12_05 Приготовление Т вектора.


13. Cиквенс.

13_01 Cиквенсовая реакция.
13_02 Приготовление сиквенсового геля и форез.
13_03 Cиквенсовая реакция с использованием CycleReader Kit.
13_04 Приготовление сиквенсового геля и форез. Прибор фирмы BioRad.


14. Выделение DNA из эукариот.

14_01 Выделение геномной ДНК из культуры клеток.
14_02 Выделение ДНК из крови.
14_03 Фенольный метод выделения DNA из мух.
14_04 Выделение DNA из мух c DEPC.
14_05 Выделение геномной ДНК из растений.


15. Работа с RNA.

15_01 Выделение RNA из культур клеток.
15_02 Препарирование мышки.
15_03 Выделение RNA из тканей мыши.
15_04 Выделение RNA из мух (горячий кислый фенольный метод).
15_05 Очистка polyA+ RNA.
15_06 Формальдегидный форез RNA - Northern.
15_07 Выделение RNA из мух центрифугированием через CsCl.
15_08 Выделение RNA из мух (с Протеиназой К).
15_09 Синтез RNA in vitro.


16. Библиотеки.

16_01 Приготовление геномной библиотеки.
16_02 Скрининг фаговой библиотеки.
16_03 PCR-гибридизация после первичного скрининга.


17. Работа с белками.

17_01 PAAG электрофорез белков.
17_02 Окрашивание белковых гелей Coomassie R250.
17_03 Окрашивание белковых гелей Zn/имидазолом.
17_04 Окрашивание белковых гелей серебром.
17_05 Определение концентрации белка на 3ММ.
17_06 Высушивание гелей без гель-драера.
17_07 Bicinchoninic acid protein assay kit.
17_08 Western блоттинг.
17_09 Dot-blot для определения рабочей концентрации антител.
17_10 PAAG электрофорез нативных белков.
17_11 Осаждение белков трихлоруксусной кислотой.
17_12 Высушивание гелей на пяльцах.
17_13 Высушивание гелей на рамке.
17_14 Окрашивание белковых гелей Coomassie R250 с метанолом.


18. Экспрессия белков.

18_01 Определение активности полимеразы.
18_02 Очистка Taq полимеразы (клон pTp4).
18_03 Очистка Pfu полимеразы (клон pETpfu в BL21(DE3)pLysS).
18_04 Очистка His6-меченного белка на Ni-NTA колонке (e(y)2/mouse).
18_05 Частота встречаемости кодонов в различных организмах.
18_06 Поверка взаимодействия двух белков на глютатион сефарозе.


19. Работа с культурами эукариотических клеток.

19_01 Базовые методы.


20. Иммуногистохимия и in situ гибридизация.

20_01 Обработка стекол.
20_02 In situ гибридизация на политенных хромосомах.
20_03 Фиксация и заливка в парафин (дрозофила).
20_04 Иммуноокрашивание срезов имаго (дрозофила).
20_05 Иммуноокрашивание политенных хромосом.
20_06 Гибридизация in situ на срезах с mRNA (дрозофила).


22. Получение серийных делеций.

22_01 Получение серийных делеций с помощью Exo III/MB nuclease.
22_02 Получение серийных делеций с DNase I.


23. Complex гибридизация (анализ профилей экспрессии).

23_01 Random primer на polyA+RNA.
23_02 Мечение total RNA с oligo(dT) праймера.
23_03 Обработка фильтров перед первой гибридизацией.


25. Работа с Drosophila melanogaster.

25_01 Приготовление корма для мух.
25_02 Разведение в больших количествах.
25_03 Сбор эмбрионов D.melanogaster.
25_04 Выделение ядерного экстракта из мух.



"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru;
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru