Амплификация.

1. колонию XL-1Blue ( XL-1Blue MRF') c чашки LB/Tetracycline поместить в 3ml 2xYT;
2. 200-300rpm, 30^oС, ON;
3. приготовить смесь:

3ml 2xYT:
10µl культуры клеток,
5µl стокового раствора фага-хелпера;

4. 200-300rpm, 37^oC, ON;

только для VCSM13:
после 30', 37^oC добавить канамицин до 25µg/ml (0.5 µl/ml для 50mg/ml стока);

5. разаликвотить по 1.2ml в 1.7ml пробирки;
6. нагреть до 65^oC, 15';
7. ЦФ NT, 5';
8. перенести по 1.0ml в 1.7ml пробирки с 70µl DMSO, смешать пипетированием;
9. хранить при:

+4^oC => ~2 месяца,
-80^oC => неограниченное время;

Рост из отдельной бляшки.

10. растить бактериальную культуру до среднелогарифмической фазы;
11. приготовить серийные разведения фага;
12. смешать 10µl бактериальной культуры c 10µl раствора фага из п.11;
13. смесь из п.13 перенести в 200µl верхнего 2хYT агара (47^oС), смешать пипетированием, нанести "каплю" на чашку с нижним 2хYT агаром (на одной чашке можно уместить >10 разведений);
14. перенести бляшку в 3ml 2хYT (только для VCSM13 - с канамицином (70µg/ml)), далее аналогично п.п. 4-9 амплификации.

Определение титра.

15. - (общий способ) клетки заражаются вирусом и высеваются на 2xYT-агар. Титр определяется по числу фаговых бляшек.
16. - (только для VCSM13) клетки заражаются вирусом и высеваются на 2xYT-агар с канамицином 25µg/ml. По числу колоний определяется титр.