Определение концентрации белка на 3ММ | Практическая молекулярная биология

Комментарии.

Общие.

Наиболее удобный метод, когда речь идет об оценке концентрации белка в большом количестве образцов (например, фракции с колонки).
Основной недостаток метода - низкая точность.
Достоинства - быстро, просто, дёшево, позволяет анализировать одновременно десятки образцов. Очень слабо чувствителен к раствору, в котором находится белок. => Этот метод - альтернатива точных методов, когда речь идет об измерении концентрации белка, растворенного в неудобном буфере.

Дополнительно, смотри замечания к "Окрашивание белковых гелей Coomassie brilliant blue R250."

По пунктам.

п. 1.

Растворы белков часто набираются в тип более или менее точно только в первый раз. Потом - какие-то фокусы с поверхностным натяжением приводят к тому, что в тип затягивается большее количество раствора. => надо обязательно контролировать объем визуально.
Контрольная полоса совершенно необходима в случае количественных измерений. Лучше, когда она присутствует и в качественных.

п. 2

Разведения обязательны, т.к. при одиночном нанесении ошибка может быть очень высока, особенно, если угодить в диапазон слишком высоких (насыщающих) концентраций.

п. 3, 4.

Фиксация белка на бумаге.

> Методы > Работа с белками > Окрашивание белка на 3MM. Определение концентрации белка на 3ММ.		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
Растворы. Staining solution Destaining solution Комментарии. Общие. По пунктам.	Наиболее удобный метод, когда речь идет об оценке концентрации белка в большом количестве образцов (например, фракции с колонки).
на 3MM бумагу нанести ряд 2^х разведений BSA (по ~1µl); нанести образец: качественная оценка в ряде образцов: нанести ряд образцов (по ~1µl); количественное измерение: нанести 2х разведения измеряемого белка (по 1µl); cушить (либо "Ветерок" ~5', либо 65^oС ~10'); смочить в ацетоне, высушить; красить ~5' в Staining Solution; отмывать в Dest. solution (~5-15'); степень отмывки контролировать визуально; сполоснуть водой; высушить, вклеить в журнал.