Выделение RNA из тканей мыши | Практическая молекулярная биология

Приготовление RNA из органов мыши.

Орган.		вес	total RNA на 1mg ткани	Volume GTB** на 1g	из 1 мыши	кол-во мышей на 2.5mg RNA
Орган.		(mg)	(µg)	(ml)	(mg)	кол-во мышей на 2.5mg RNA
Liv	печень	1900	11	20	20.9	1
Spl	селезенка (м.б. 6µg/mg)	180	5	50	0.9	3
Kid	2 почки	450	3	20	1.35	2
Ht	сердце	180	1	20	0.18	14
Lg	лёгкие	200	1.9	20	0.38	7
Ton	язык	120	1	20	0.12	21
Pg	2 prepuital glands	65	2.7	20	0.1755	15
Mus	мышцы (м.б. 1.3µg/mg)	1000	0.8	15	0.8	4
Ts	2 тестикулы	250	1.3	25	0.325	8
Sv	2 seminal vesicules	120	1.5	20	0.18	14
Mg	молочные железы			?
Ov	2 яичника	35	2.2	20?
Ut	матка	140	3.7	20?
St	желудок	300	1.8	20	0.54	5
Co	кишка толстая	530	3.7	20	1.961	2
In	кишка тонкая	1300	4.2	20	5.46	1
Ln	лимфатические узлы L1-L5	120	3.4	50 to 70	0.408	7
Ty	тимус (молодые)	100	2.1	50 to 70	0.21	12
Hg	2 harderian glands	20	3.2	30?	0.064	40
Sg	2 слюнные железы*	150	6.6	30	0.99	3
B-O	2 обонятельные доли (мозг)*	30	1.3	30	0.039	65
B-e	2 больших полушария (мозг)*	230	1.3	30	0.299	9
B-l	2 cerebellum*	60	1.3	30	0.078	33
B-M	medulla*	150	1.3	30	0.195	13
Ad	надпочечники	35	0.9	30
	мышь	30g

* для мозга, жировой ткани и слюнных желёз лучше проводить экстракцию с повышенным содержанием хлороформа (либо провести ЦФ ткани в GTB ещё до экстракции фенолом). Все эти меры нужны для того, чтобы избавиться от большей части жира (липидов), которые мешают экстракции.
Возможно, что для мозга выход RNA занижен - должно быть ~2 µg/mg.
** Указанные значения - минимальные. Следует иметь в виду, что уменьшение объёма буфера приводит к весьма заметному снижению выхода RNA. Например, при экстракции RNA из 1g печени в 50ml GTB можно рассчитывать на ~10mg total RNA, а при экстракции в 5ml на ~3.5mg.
Содержание totalRNA:

кровь => 1-5 µg/ml,
ооцит: => 0.35ng,
32-клеточная стадия => 1.47ng,
10 дневный эмбрион => 650 µg,
соединительная ткань, хвосты, уши и т.п. => ~0.5 µg на 1mg ткани.

> Методы > РНК > Выделение из тканей. Выделение RNA из тканей мыши.		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
Растворы. GTB Na citrate Приготовление RNA из органов мыши. Комментарии. По пунктам.
ткань залить жидким азотом в керамической ступке, растереть в порошок; долить жидкий азот, добавить GTB (объём - смотри таблицу); залить жидким азотом, растереть в порошок; перенести лизат в пробирку, расплавить; добавить 1/10V AcONa, pH5.0 (3M); смешать (и заодно раздробить DNA) несколько (3-4) раз пропустив лизат через ~19G иглу; добавить 1V водонасыщенного фенола, смешать; NT, ~5'; добавить 1/5V Х:I, интенсивно смешать/вортекс (3-4'); ЦФ~1krpm, NT, 5-10'; ЦФ>4krpm, NT, 10'; перенести водную фазу в пробирку с 1V водонасыщенного фенола, смешать повторить пп.7,8; ЦФ>4krpm, NT, 10'; экстрагировать хлороформом; добавить 1V изопропанола, смешать; -20^oС, 1h-ON; ЦФ>4krpm, 4^oС, 10-20'; сполоснуть 75% EtOH; растворить в H₂O(RNase free), хранить при -70^oС.