Разведение D.melanogaster в больших количествах | Практическая молекулярная биология

Комментарии.

"Стартовая популяция" либо разгоняется из нескольких мух, либо специально поддерживается на температуре 18^oС. При 18^oС мухи живут по замедленному жизненному циклу и их достаточно перебрасывать на новый корм раз в 2-3 недели.
Количество корма подбирается эмпирически. Важны следующие параметры:

корм не должен быть текучим;
личинки должны разрабатывать его по возможности весь;
он не должен быть очень твёрдым (зависит от количества и качества агара), иначе личинки не смогут его разрабатывать (см. "Выявленные проблемы").

При пересаживании мух из одной ёмкости в другую удобно их примаривать при помощи ваты или марли, смоченной в эфире. Вата прикладывается к отверстию в ёмкости, а сама ёмкость держится на боку, чтобы мухи не падали на корм, к которому могут прилипнуть. Постукивая по стенкам, мух стрясают в нижнюю часть ёмкости. Далее пёрышком мух сметают в новую ёмкость. На этом этапе могут вызвать проблемы отслаивание корма и влажные стенки ёмкости (см. "Выявленные проблемы").
Мы проделывали эту процедуру в течение 7 дней, пересаживая ежедневно мух из четырёх ёмкостей. В каждой ёмкости находилось в среднем по 4000 мух. При этом удавалось получить популяцию примерно в 130000 - 150000 мух. Для сбора эмбрионов мы используем мух от первых 6 перебросок. Те ёмкости, на которые мухи были посажены на 7 день, в дальнейшем используются для поддержания будущей "стартовой популяции".
Обычно на 3-4 день в корме становятся видны молодые личинки (см. "Выявленные проблемы"). На 6-7 день личинки начинают выползать на стенки ёмкостей и окукливаться (см. там же.) Взрослые особи вылетают на 10-11 день. Удобно синхронизовать вылет мух от всех перебрасываний. Этого можно достичь, поставив ёмкости с отложенными ранее эмбрионами на 18^oС на несколько дней.

Выявленные проблемы.

Ситуация	Что имеет смысл делать
Личинки есть, но они не могут разрабатывать корм.	1. Мы пробовали мазать корм сверху нетолстым слоем нового корма, но без агара. Личинки сразу становятся заметны и подвижны. Этот способ "реанимации" плох тем, что стенки ёмкостей сильно увлажняются. В дальнейшем при перебрасывании мух могут произойти большие потери. 2. Проверить концентрацию агара в корме.
Стенки ёмкостей влажные.	Подсушить стенки ёмкости либо протерев фильтровалкой, либо вентилятором, стараясь не сильно повредить мух.
От дна ёмкостей отслаивается корм.	Не дать корму придавить мух.
Личинкам на стенках не хватает места и они, не выползая, окукливаются на корме.	Можно вставить в корм картонки, обёрнутые в Saran Wrap, чтобы личинки могли окуклиться на них. Важно, чтобы предлагаемая личинкам поверхность не обладала бы большой гигроскопичностью.

> Методы > Работа с D.melanogaster > Получение больших популяций дрозофилы. Разведение D.melanogaster в больших количествах (100 - 150 тыс).		Главная. Новости. О проекте. Справочник. Рестриктазы. Методы. Растворы. Расчёты. Обзоры. Обучение. Ссылки. Скачать сайт. Образовательные ресурсы.
	Павел Марданов; Дарья Копытова Институт Биологии Гена; группа экспрессии генов.
Для начала работы необходимо иметь "стартовую" популяцию мух в количестве ~ 1-2 тысячи. Для разведения мух используются трёхлитровые ёмкости (лучше пластиковые) с крышкой, в которой проделано отверстие диаметром ~80mm. Отверстие заделано капроном с диаметром отверстий ~0.12mm. В ёмкости заливается корм для взрослых мух (~250ml на одну ёмкость). После того, как корм застывает, на него можно высаживать мух. При пересадке мы примариваем мух эфиром. Для оценки количества мух в одной ёмкости удобно пользоваться весами (в среднем, масса одной мухи ~1mg). В одной трёхлитровой ёмкости должно быть не больше 3000 - 3500 мух (при большем количестве получается явное перенаселение и не происходит увеличения количества мух нового поколения). В этом случае можно рассчитывать получить 4000 - 6000 мух нового поколения. После того, как мухи были пересажены, ёмкости с ними необходимо поставить в помещение, в котором поддерживается температура 25^oС, влажность 70-75%, а также чередование двенадцатичасовых "дня" и "ночи". В последующие несколько дней необходимо ежедневно пересаживать мух на новый корм в новые ёмкости, где они будут по-прежнему откладывать эмбрионы.