Среды и добавки.

Инструкция по работе с прописями растворов откроется в новом окне при нажатии на эту кнопку:

Сток 100ml 150ml 200ml 300ml 600ml 750ml 1. Бакто-триптон тв. 1g 1.5g 2.0g 3.0g 6.0g 7.5g 2. Бакто-дрож. экст. тв. 0.5g 0.75g 1.0g 1.5g 3.0g 3.75g 3. NaCl тв. 1.0g 1.5g 2.0g 3.0g 6.0g 7.5g 4. H2O mQ 95.3g 143g 190.7g 286g 572g 715g 5. агар верх. тв. 0.65g 0.98g 1.3g 1.95g 3.90g 4.88g 6. агар ниж. тв. 1.5g 2.3g 3.0g 4.5g 9.0g 11.3g 7. NaOH 10N 16.7µl 25µl 33.4µl 50µl 100µl 125µl 8. MgSO4 1M 1ml 1.5ml 2.0ml 3.0ml 6.0ml 7.5ml

LTB: п.1, 3, 4, 7, 8.
LB: п.1, 2, 3, 4, 7.
LB/Mg: п.1, 2, 3, 4, 7, 8.

• Агар (как верхний, так и нижний) нужно смешать сразу после автоклавирования, иначе он застынет как неоднородная субстанция: внизу существенно более концентрированный, чем вверху.

LB (low salt)

для работы с Zeocine pH 7.0

Сток 100ml 150ml 200ml 300ml 600ml 750ml Бакто-триптон тв. 1g 1.5g 2.0g 3.0g 6.0g 7.5g Бакто-дрож. экст. тв. 0.5g 0.75g 1.0g 1.5g 3.,0g 3.75g NaCl тв. 0.5g 0.75g 1.0g 1.5g 3.,0g 3.75g H2O mQ 95.3g 143g 190.7g 286g 572g 715g NaOH 10N 16.7µl 25µl 33.4µl 50µl 100µl 125µl

M9

10х

Конц. Сток 50ml 75ml 100ml Na2HPO4x 12 H2O 48mM 358.14g/M 8.60g 12.90g 17.19g KH2PO4 22mM 136.09g/M 1.50g 2.25g 3.00g NaCl 8.5mM 58.44g/M 0.25g 0.38g 0.50g NH4Cl 18.7mM 53/49g/M 0.50g 0.75g 1.00g

Среда М9:

Конц. Сток 100ml 150ml 200ml M9 1x 10x 10ml 15ml 20ml Глюкоза 0.4% 10% 4ml 6ml 8ml H2O   стер. 86ml 129ml 172ml

+ добавки:

тиамин 1mM 1M 100µl 150µl 200µl MgSO4 1mM 1M 100µl 150µl 200µl CaCl2 0.1mM 1M 10µl 15µl 20µl

Для заливки чашек добавить агар до 3%.

NZY

1 L 200ml NZ aмин 10g 2g NaCl 5g 1g Бакто-дрож. экст. 5g 1g MgSO4xH2O 2g 0.4g H2O 950ml 190ml

SOC, SOB

(хранить при NT).

Сток 200ml 400ml Бакто-триптон   4.0g 8.0g Бакто-дрож. экст.   1.1g 2.2g NaCl 5M 0.4ml 0.8ml KCl 1M 2.0ml 4ml H2O   ~196ml ~391ml

1. автоклавировать, охладить до <60^oС;
2. добавить

0.01V 2M Mg²⁺{= 1M MgCl₂ + 1M MgSO₄}  
0.01V 2M glucose;  

3. фильтровать через 0.2µm фильтр;
4. аликвотить, хранить при -20^oC, (-70^oC).

SOB получается, если не добавлять глюкозу.

Terrific Broth

pH 7.0

100ml 150ml 200ml 300ml 667ml Бакто-триптон 1.2g 1.8g 2.4g 3.6g 8.0g Бакто-дрож. экст. 2.4g 3.6g 4.8g 7.2g 16.0g Глицерол 0.4ml 0.504g 0.6ml 0.757g 0.8ml 1.009g 1.2ml 1.513g 2.667ml 3.362g H2O до V 90ml 135ml 180ml 270ml 600ml автоклавировать, затем добавить KPO4, pH7.0 1.0M 10ml 15ml 20ml 30ml 66.7ml

YENB

pH 7.5: (безсолевая среда для приготовления электрокомпетентных клеток).

Конц. Сток 0.45 L 0.5 L 0.9 L 1.0 L Бакто-дрож. экст. 0.75% тв. 3.4g 3.75g 6.75g 7.5g Nutrient Broth 0.8% тв. 3.6g 4.0g 7.2g 8.0g NaOH   10N ~243 µl ~270 µl ~490 µl ~540 µl

2 YT

%(w/w) 200ml 1L Бакто-триптон 1.6 3.2g 16g Бакто-дрож. экст. 1.0 2g 10g NaCl 0.5 1g 5g H2O 96.9 193.8ml 969ml

Добавки.

IPTG

С₆H₁₈O₅S; Mw=238.3g/M;

Конц. 1ml 5ml 10ml IPTG 200mg/ml 0.2mg 1.0g 2.0g

Стерилизовать фильтрованием.

Хранить 4^oC (сухой),-20^oС (раствор в H₂O);

- для плазмид - на чашку ~4µl,
- для М13 - на 3 ml верхнего агара ~1-4µl.

X-Gal

C₁₄H₁₅BrClNO₆ Mw= 408g/M;

Конц. 1ml 5ml 10ml X-Gal 20mg/ml (2%) 20mg 0.1g 0.2g

Хранить 4^oС в темноте (сухой); -20^oС в темноте (раствор в DMFA (либо DMSO c эквивалентным результатом)).

- для плазмид - на чашку 40µl,
- для М13 - на 3ml верхнего агара 40µl.

Глюкоза

С₆H₁₂O₆ Mw=180.16;

Конц. Сток 5ml 10ml 50ml 100ml 150ml 200ml C6H12O6 1M 180g/M 0.90g 1.80g 9.01g 18.02g 27.03g 36.03g

Стерилизовать фильтрованием.

Мальтоза

100х раствор для бактериофага лямбда;

Конц. Сток 10ml 50ml 100ml мальтоза 20% тв. 2g 10g 20g

Стерилизовать фильтрованием.

Thiamine

Vitamin B₁ Aneurine; C₁₂H₁₇ClN₄OSxHCl; Mw=337.3g/M;

Конц. Сток 1ml 5ml 10ml 25ml C12H17ClN4OSxHCl 1M 337.3g/M 0.337g 1.69g 3.37g 8.43g

Стерилизовать фильтрованием.

"Практическая Молекулярная Биология" http://molbiol.edu.ru
e-mail: pmb@molbiol.edu.ru